Virologie: marqueurs viraux

Question 1

quelles sont les maladies virales asymptomatiques chez le sujet immunodéprimé (diagnostic virologique important)?

Answer 1

rougeole (sans boutons), oreillons (grossissement glandes parotides chez l’enfant), rubéole

Question 2

à quel niveau le diagnostic virologique est intéressant?

Answer 2

intérêt médical et économique = dès diagnostic d’une infection virale on arrête les antibiotiques, on réduit analyses complémentaires et la durée d’hospitalisation

Question 3

qu’est-ce qu’un syndrome mononucléosique?

Answer 3

un sujet qui a des grands lymphocytes hyperbasophiles dans le sang circulant

Question 4

le diagnostic virologique permet de connaître quelles informations à propos du statut du patient vis-à-vis du virus?

Answer 4

• si infection guérie (sujet immun au virus)
• si infection chronique provoquée par un virus
• donneurs de sang / organes porteurs de virus
• patient source après accident exposition au sang/sexuelle

Question 5

un fœtus ou nouveau-né est-il exposé à un risque d’infection virale pdt la grossesse ou naissance?

Answer 5

oui

Question 6

qu’est-ce que le diagnostic direct des marqueurs viraux?

Answer 6

recherche directe des virus ou constituants dans les prélèvements pathologiques

Question 7

qu’est-ce que le diagnostic indirect des marqueurs viraux?

Answer 7

recherche des témoins = mise en évidence d’une réponse immunitaire de l’hôte

Question 8

comment identifier une infection virale par immunité innée (peu fréquent)? = diagnostic indirect

Answer 8

production d’interférons alpha

Question 9

comment identifier une infection virale par immunité acquise? = diagnostic indirect

Answer 9

recherche d’Ac dans sérum ou d’autres liquides biologiques

Question 10

quelles sont les 3 formes de réaliser un diagnostic direct?

Answer 10

• au microscope électronique (peu fréquent car long)
• en isolant virus par culture cellulaire
• méthode ELISA = recherche des constituants structuraux libérés dans circulation ou dans cellules / tissus

Question 11

pour quel diagnostic la qualité des prélèvements est très importante? quand faire le prélèvement?

Answer 11

diagnostic direct
le + tôt possible dès début signes et avant tout traitement

Question 12

où faire le prélèvement pour une infection respiratoire? (diagnostic chez les immunodéprimés d’infection respiratoire)

Answer 12

écouvillonnage fosses nasales, aspiration rhino-pharyngée (enfant) et LBA (Laryngo-Balnéo-Auscultation) pour prélever virus dans poumons

Question 13

comment diagnostiquer une infection neurologique?

Answer 13

prélever LCR par ponction lombaire ou cervicale

Question 14

où faire le prélèvement pour une infection oculaire?

Answer 14

écouvillon conjonctival, prélèvement d’humeur aqueuse

Question 15

pour une infection digestive où chercher les virus?

Answer 15

dans les selles, dans biopsies intestinales

Question 16

quel prélèvement réaliser pour diagnostic virologique si pas de signes / lésions extérieures?

Answer 16

sanguin (sur tube à héparine = recherche à partir du plasma pour culture / EDTA = recherche acides nucléiques viraux)

Question 17

on peut rechercher directement les virus et acides nucléiques grâce à quel test pour virus à ADN? et à ARN?

Answer 17

ADN: PCR
ARN: RT-PCR

Question 18

dans quels cas on utilise la méthode moléculaire du diagnostic direct?

Answer 18

• pour des virus non ou difficilement cultivables
• pour prélèvement qui contiennent très peu de virus (LCR, humeur aqueuse)

Question 19

dans quelles conditions le prélèvement doit-il être transmis au laboratoire?

Answer 19

réfrigéré, très vite (<3h pour virus ARN; sang prélevé sur EDTA)

Question 20

quels sont les 2 moyens de détecter des Ag solubles?

Answer 20

immunochromatographie et méthode ELISA

Question 21

on recherche les protéines de quels virus (non cultivables) par immunochromatographie?

Answer 21

rotavirus et adénovirus dans les selles = provoquent gastro-entérites

Question 22

dans les prélèvements respiratoires par méthode ELISA on peut détecter les protéines de quels virus?

Answer 22

protéines du VRS, du virus de la grippe

Question 23

dans les prélèvements de la circulation par méthode ELISA on peut détecter les Ag de quels virus?

Answer 23

Ag P24 pour VIH et Ag Hbs pour hépatite B

Question 24

comment détecter les Ag par immunofluorescence directe?

Answer 24

Ac marqué d’une molécule fluorescente va directement aller sur l’Ag

Question 25

comment détecter les Ag par immunofluorescence indirecte? = + sensible (on peut voir grâce aux rayons UV)

Answer 25

on a un 1er Ac qui se fixe sur l’Ag puis un 2nd (marqué) qui va se mettre sur 1er Ac

Question 26

par immunofluorescence directe ou indirecte, on a retrouvé les protéines de quel virus dans le cytoplasme des cellules respiratoires? dans un prélèvement génital on cherche les protéines de quel virus? dans les polynucléaires sanguins on cherche les protéines de quel virus?

Answer 26

VRS
HSV (Herpès Simplex Virus)
CMV

Question 27

quel est le principe de la RT PCR pour les virus ARN?

Answer 27

ARN retranscrit en ADN dans un tube par enzyme transcriptase inverse (produite par rétrovirus) > effectuer un PCR

Question 28

quelles sont les étapes de la PCR?

Answer 28

1) on dénature 2 brins d’ADN par chaleur pour cibler une séquence précise par des amorces
2) hybridation de l’amorce avec brin à une Tº inférieure
3) élongation des séquences à une Tº intermédiaire
4) amplification + introduction intercalant
5) migration amplifias dans gel d’agarose + intercalation visible
6) test positif ou négatif

Question 29

la PCR emboîtée (pour virus ADN/ARN dont la quantité d’acides nucléiques prélevée est trop faible) permet la détection de quel virus dans quel liquide? pour diagnostiquer quoi?

Answer 29

détection d’ADN du virus herpès (HSV1) dans LCR
diagnostic méningite
=> on réalise 2 tours de PCR mais 2e sur les amplifias

Question 30

comment se fait le PCR en temps réel?

Answer 30

grâce à un marqueur fluorescent sur les amplifias (+ sensible)

Question 31

quelles sont les indications pour un sérodiagnostic (diagnostic indirect)?

Answer 31

• virus dont culture très lente/ difficile/ impossible
• infection “décapitée”: limité réplication virus (antiviraux)
• infection dont l’étiologie exige méthode exploration invasive
• un diagnostic rétrospectif d’une infection ancienne ou récente (AES)
• évaluer guérison infection en cours
• mettre en évidence synthèse Ac pour un vaccin

Question 32

l’infection au VIH est chronique dans quels cas? et au VHC?

Answer 32

VIH = 100%
VHC = 70-80%

Question 33

qu’est=ce que la séroconversion? et la séro-élévation? (significatives)

Answer 33

séroconversion: séropositivité ou séronégativité face à un virus (VIH)
séro-élévation: augmentation (minimum 4) du titre en Ac sériques à 2-3 semaines d’intervalle

Question 34

comment sont prélevés les virus dans le sérodiagnostic? les échantillons sont transportés à quelle Tº?

Answer 34

sanguin: tube sans anticoagulant, LCR, salive…
Tº ambiante

Question 35

pour diagnostic indirect, lors de la recherche d’une immunité, que peut-on détecter lors d’1 seul prélèvement? pour quels virus par ex? dans quel contexte par ex?

Answer 35

détection d’IgG lors d’un seul prélèvement (si présents: sujet immunisé)
varicelle, rubéole, oreillons, rougeole, poliovirus
AES

Question 36

la détection d’IgM spécifiques permet quels diagnostics?

Answer 36

• diagnostic + précoce ou d’infection congénitale
• détection dans le LCR de l’infection du SNC par virus

Question 37

qu’est-ce que l’avidité mature des IgG? on peut la déterminer grâce à quel test?

Answer 37

au départ: IgG ont une faible avidité mais avec la maturation ils deviennent bcp + avides pour les Ag
=> test de décollement des IgG des Ag par 2 tests ELISA:
- ELISA 1: permet de vérifier présence d’IgG
- ELISA 2: décoller IgG > peu IgG = faible avidité / bcp IgG = forte avidité

Question 38

le test de décollement des IgG est utile pour diagnostic de quel virus chez femme enceinte?

Answer 38

cytomégalovirus (CMV):
- si infection ancienne (pré conception): pas de risques pour fœtus
- si infection récente: risque infection pour fœtus

Question 39

le western blot est une méthode de détection des…?

Answer 39

Ac